NELF-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405667

Visão geral

NELFB codifica a NELF-B, uma subunidade central do complexo de fator de elongação negativo (NELF), que coopera com o DSIF para regular a pausa promotor-proximal da RNA polimerase II e coordenar a elongação transcricional produtiva. Por meio desse ponto de controle, a NELF-B influencia programas de expressão gênica de resposta rápida a estímulos, o processamento de RNA co-transcricional e o controle, associado à cromatina, da cinética de transcrição. A pausa dependente de NELF-B integra-se a vias de sinalização e de resposta ao estresse que ajustam finamente a saída transcricional e as transições de estado celular. A desregulação do controle da elongação e de redes associadas à pausa tem sido implicada em programas transcricionais oncogênicos e em outras doenças caracterizadas por regulação gênica alterada, tornando o NELFB um ponto útil para estudos mecanísticos do controle transcricional.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NELF-B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NELFB em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NELFB, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NELFB na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NELF-B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NELFB para a investigação da sinalização de NELF-B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NELFB críticos para a função NELF-B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NELFB para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NELF-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NELF-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NELFB. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NELF-B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NELF-B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NELFB para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NELFB definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.