NEDL2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-410607-LAC

O HECW2 humano codifica a NEDL2, uma ligase E3 ubiquitina-proteína do tipo HECT que regula a proteostase ao catalisar a transferência de ubiquitina para substratos específicos, influenciando assim a sua estabilidade, localização e a saída de sinalização. A NEDL2 está implicada no controlo do desenvolvimento neuronal e da função sináptica por meio da modulação, dependente de ubiquitina, de vias que governam a renovação de proteínas, a dinâmica do citoesqueleto e programas transcricionais. Alterações em HECW2/NEDL2 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-o um nó relevante para estudar como a ubiquitinação molda redes de sinalização celular. Na investigação biomédica, o HECW2 oferece um ponto de entrada mecanístico para analisar a regulação mediada por ubiquitina em contextos neuronais e de outros tipos celulares, incluindo efeitos a jusante na expressão génica e nos circuitos de resposta ao stress.

As Partículas de Ativação Lentivirais NEDL2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de HECW2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais NEDL2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição HECW2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de NEDL2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo HECW2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.