NEDL1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406027

Visão geral

HECW1 codifica a ligase E3 ubiquitina‑proteína humana NEDL1, uma enzima com domínio HECT que catalisa a transferência de ubiquitina para proteínas substrato, regulando a sua estabilidade e o output de sinalização. A NEDL1 participa em vias de proteostase dependentes de ubiquitina que influenciam a renovação/degradação de proteínas, respostas ao stress e decisões de destino celular, e tem sido associada à modulação da sinalização apoptótica e da homeostase neuronal. Por meio de ubiquitinação seletiva, a NEDL1 pode moldar programas transcricionais a jusante e redes de controlo de qualidade que são frequentemente perturbadas na neurodegeneração e em fenótipos celulares associados ao cancro. Como resultado, o HECW1 é de interesse para dissecar a organização das vias de ubiquitina e a regulação específica por substrato em sistemas de células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NEDL1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HECW1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HECW1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HECW1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NEDL1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HECW1 para a investigação da sinalização de NEDL1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HECW1 críticos para a função NEDL1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HECW1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NEDL1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NEDL1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HECW1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NEDL1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NEDL1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HECW1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HECW1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.