Nectin 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401994-ACT

NECTIN2 kodiert Nectin-2 (CD112), ein immunglobulinähnliches Zelladhäsionsmolekül, das an Adhärenskontakten angereichert ist und dort Ca2+-unabhängige Zell-Zell-Kontakte über homophile und heterophile Interaktionen vermittelt. Durch die Bindung an Afadin (AF6) und die Koordination mit Cadherin-Catenin-Komplexen beeinflusst Nectin-2 den Aufbau von Zellkontakten, die epitheliale Polarität sowie den Umbau des Zytoskeletts während Gewebeorganisation und Migration. Nectin-2 ist außerdem an der Immunerkennung beteiligt, da es als Ligand für DNAM-1 (CD226) und TIGIT fungiert und damit die Adhäsionsbiologie mit der Signalübertragung in NK- und T-Zellen an immunologischen Synapsen verknüpft. Eine fehlregulierte NECTIN2-Expression wurde mit veränderten Adhäsionszuständen, Phänotypen der Immunflucht und progressionsassoziierten Merkmalen bei mehreren malignen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von NECTIN2 in der Tumor-Immun- und Barrierebiologie stützt.

Nectin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NECTIN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nectin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NECTIN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NECTIN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nectin 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NECTIN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nectin 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nectin 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NECTIN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.