NDUFS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427031

概要

Ndufs3は、ミトコンドリア呼吸鎖複合体I（NADH：ユビキノン酸化還元酵素）を構成する核コードの必須サブユニットであるNDUFS3をコードしています。複合体Iは、NADHからユビキノンへの電子伝達を担い、ミトコンドリア内膜を介したプロトン汲み出しにも寄与します。NDUFS3が正常に機能することは、効率的な酸化的リン酸化、ミトコンドリア膜電位の維持、ならびに細胞内レドックスバランスの調節に必要です。複合体Iの構成要素が障害されると、ATP産生が低下し、活性酸素種（ROS）が増加して、代謝の再編成やストレスシグナル伝達に影響を及ぼし得ます。マウスモデルでは、Ndufs3の攪乱は、神経筋、心臓、神経変性関連の表現型に関与するミトコンドリア機能障害メカニズムを研究する上で重要です。

NDUFS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNdufs3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ndufs3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ndufs3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NDUFS3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NDUFS3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ndufs3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NDUFS3の機能に不可欠なNdufs3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ndufs3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NDUFS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNDUFS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ndufs3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NDUFS3 HDRプラスミド（m）および NDUFS3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNdufs3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNdufs3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。