NDUFS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416401-ACT

NDUFS1 codifica uma subunidade central do complexo I da cadeia respiratória mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidoredutase), que contribui para a transferência de elétrons do NADH para a ubiquinona e dá suporte ao bombeamento de prótons através da membrana mitocondrial interna. Por meio de seu papel na fosforilação oxidativa, NDUFS1 influencia o potencial de membrana mitocondrial, a produção de ATP e a homeostase redox celular, vinculando-o à adaptação metabólica e ao manejo de espécies reativas de oxigênio. A função alterada do complexo I está associada a fenótipos de disfunção mitocondrial e tem sido estudada no contexto de distúrbios neuromusculares e neurodegenerativos, bem como de respostas ao estresse metabólico. Assim, NDUFS1 é um alvo útil para investigar como a integridade da cadeia de transporte de elétrons molda a bioenergética, a sinalização mitocondrial e a ativação de vias de estresse.

NDUFS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NDUFS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NDUFS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NDUFS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NDUFS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NDUFS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NDUFS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NDUFS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NDUFS1 em células tumorais com expressão de NDUFS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.