NDST1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404078

Visão geral

NDST1 (N-desacetilase/N-sulfotransferase 1) é uma enzima-chave residente no Golgi que inicia e propaga a N-sulfatação durante a biossíntese de proteoglicanos de heparan sulfato, moldando os padrões de sulfatação que determinam a especificidade de ligação de ligantes. Ao controlar a estrutura do heparan sulfato, a NDST1 modula a organização da matriz extracelular e a função de correceptores na superfície celular, influenciando vias de sinalização de fatores de crescimento e morfógenos, incluindo os eixos FGF, WNT, Hedgehog e VEGF. Essas interações dependentes de sulfatação afetam programas de adesão, migração e diferenciação celular que são centrais para o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A atividade desregulada da NDST1 e a composição alterada do heparan sulfato têm sido associadas a diversas condições fisiopatológicas, incluindo remodelação do microambiente tumoral, sinalização relacionada à fibrose e fenótipos de neurodesenvolvimento, tornando a NDST1 um alvo útil para estudos mecanísticos da sinalização dirigida pelo glicocálice.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NDST1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NDST1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NDST1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NDST1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NDST1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NDST1 para a investigação da sinalização de NDST1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NDST1 críticos para a função NDST1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NDST1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NDST1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NDST1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NDST1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NDST1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NDST1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NDST1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NDST1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.