NDRG1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402294-ACT

NDRG1（N-myc downstream regulated gene 1）は、細胞質に局在するストレス応答性タンパク質をコードしており、細胞分化、脂質および鉄の恒常性、ならびにシグナル伝達ネットワークの調節に関与するとされています。NDRG1は低酸素、p53、腫瘍性MYCシグナルによって制御され、増殖、上皮―間葉ダイナミクス、細胞ストレス応答を制御する経路とも関連づけられています。ヒトの生物学においては、NDRG1発現の変化が、さまざまな組織での腫瘍進展や転移性挙動、さらに遺伝性の末梢神経障害の表現型と関連していることが報告されています。これらの特徴により、NDRG1は、微小環境ストレスが細胞状態の変化へと結びつく転写プログラムを解明するうえで有用な結節点となります。

NDRG1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NDRG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NDRG1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NDRG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNDRG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NDRG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNDRG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNDRG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNDRG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNDRG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。