NDR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402716-ACT

STK38 codifica a NDR1, uma quinase de serina/treonina da família NDR/LATS que atua como um efetor central em vias de sinalização relacionadas à Hippo, coordenando a proliferação celular, a apoptose e a homeostase tecidual. A NDR1 integra sinais a montante provenientes de quinases MST e de proteínas de andaime para regular a duplicação do centrossoma, a progressão mitótica e a organização do citoesqueleto, conectando a sinalização por quinases ao controlo do ciclo celular e a programas de polaridade. Também contribui para respostas ao stress e para a imunidade inata por meio da modulação de redes transcricionais e de quinases, com efeitos a jusante na sobrevivência celular e na sinalização inflamatória. A desregulação da atividade da NDR1 ou da conectividade da via tem sido associada, em sistemas experimentais, a fenótipos de controlo aberrante do crescimento e instabilidade genómica relevantes para a biologia do cancro e para mecanismos de doenças neurodegenerativas.

NDR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STK38 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NDR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STK38 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STK38, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NDR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STK38 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NDR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NDR1 em células tumorais com expressão de STK38 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.