NAT-10 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-406713-NIC

NAT10 codifica a NAT-10, uma N-acetiltransferase nucleolar/citoplasmática implicada na acetilação de RNA e de proteínas, incluindo a regulação da N4-acetilcitidina (ac4C) em mRNA, o que pode influenciar a estabilidade dos transcritos e a eficiência de tradução. A NAT-10 participa da biogênese de ribossomos, da homeostase nucleolar e de processos ligados ao ciclo celular, como respostas a danos no DNA e sinalização de estresse de replicação, integrando o controle da expressão gênica dependente de acetilação com programas celulares de crescimento. Alterações na atividade ou na expressão de NAT10 têm sido associadas na literatura a fenótipos proliferativos, instabilidade genômica e metabolismo de RNA desregulado observados em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar adaptação ao estresse e proteostase. Como resultado, NAT10 é frequentemente investigado em vias que conectam modificação de RNA, organização da cromatina e programas do tipo senescência em células humanas.

NAT-10 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NAT10 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NAT10. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NAT10. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NAT10 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.