Na+ CP type VIIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422823
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Na+ CP type VIIIα O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Na+ CP type VIIIα, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Na+ CP type VIIIα Anticorpo (W-78): sc-81884
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Na+ CP type VIIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422823 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Scn8a codifica o canal de sódio murino dependente de voltagem Na⁺ CP tipo VIIIα, um determinante-chave para a iniciação do potencial de ação e o disparo em alta frequência nos neurônios. Ao mediar o influxo rápido de Na⁺ no segmento inicial do axônio e nos nós de Ranvier, ele sustenta a excitabilidade neuronal e a propagação do sinal, além de se acoplar funcionalmente a vias de repolarização da membrana e de homeostase iônica. Alterações na atividade de SCN8A são amplamente usadas para modelar mecanismos de hiperexcitabilidade relacionados a canalopatias, incluindo suscetibilidade a crises, anormalidades no processamento sensorial e fenótipos do neurodesenvolvimento. Assim, esse alvo é relevante para estudar como o “gating” (abertura/fechamento) e a distribuição de canais de sódio moldam a fisiologia em nível de circuitos e programas transcricionais a jusante.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type VIIIα (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Scn8a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Scn8a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Scn8a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Na+ CP type VIIIα.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Scn8a para a investigação da sinalização de Na+ CP type VIIIα, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Scn8a críticos para a função Na+ CP type VIIIα
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Scn8a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Na+ CP type VIIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Na+ CP type VIIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Scn8a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Na+ CP type VIIIα Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Na+ CP type VIIIα (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Scn8a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Scn8a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.