Na⁺ CP type IIIα Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-422820-LAC

Scn3a codifica, no camundongo, a subunidade α do canal de sódio voltagem-dependente do tipo Na+ CP IIIα (Nav1.3), uma proteína de membrana formadora de poro que sustenta a iniciação e a propagação do potencial de ação em células excitáveis. Ao mediar um influxo rápido e transitório de Na+, o Nav1.3 contribui para a despolarização da membrana neuronal, os padrões de disparo e a excitabilidade da rede, integrando-se à homeostase iônica e a vias de sinalização dependentes de atividade. A expressão de Scn3a é regulada dinamicamente durante o desenvolvimento e após lesão neural, e alterações na atividade do canal têm sido associadas a fenótipos de hiperexcitabilidade relevantes para epilepsia, processamento da dor e transtornos do neurodesenvolvimento. Essas propriedades fazem de Scn3a um alvo útil para dissecar as contribuições dos canais de sódio para a função de circuitos e para mecanismos de doença impulsionados por excitabilidade em modelos murinos.

As Partículas de Ativação Lentivirais Na+ CP type IIIα (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Scn3a numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Na+ CP type IIIα (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Scn3a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Na+ CP type IIIα. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Scn3a e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.