Na⁺ CP type Iα CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422818

概要

Scn1a は、電位依存性ナトリウムチャネルの α サブユニットである Na+ CP type Iα をコードしており、ニューロンにおける活動電位の開始と伝播を規定する主要因子である。軸索起始部およびランビエ絞輪における迅速な内向き Na+ 電流を制御することで、発火閾値、スパイクのタイミング、ならびにネットワーク同期性を形成する。Scn1a の機能は、興奮性–抑制性バランス、活動依存的シグナル伝達、イオン恒常性など、シナプス伝達と回路の安定性に影響する経路と交差している。SCN1A の遺伝学的／機能的な攪乱は、発作感受性および神経発達表現型と強く関連しており、マウスモデルにおける機序研究の重要な標的座位となっている。

Na+ CP type Iα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるScn1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Scn1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Scn1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Na+ CP type Iαタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Na+ CP type Iαシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Scn1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Na+ CP type Iαの機能に不可欠なScn1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Scn1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Na+ CP type Iα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNa+ CP type Iα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Scn1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Na+ CP type Iα HDRプラスミド（m）および Na+ CP type Iα HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはScn1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のScn1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。