Nanos2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404123-ACT

O gene humano **NANOS2** codifica a Nanos2, uma proteína conservada de ligação a RNA, mais conhecida por regular o destino das células germinativas ao controlar programas de expressão gênica pós-transcricionais. A Nanos2 participa de redes de estabilidade de mRNA e de repressão traducional que ajudam a manter a identidade da linhagem germinativa e a evitar diferenciação inadequada, integrando-se a vias que governam a progressão do ciclo celular, a entrada em meiose e o timing do desenvolvimento. Alterações na atividade da família **NANOS** têm sido associadas a defeitos no desenvolvimento de células germinativas e à desregulação da biologia reprodutiva, e a expressão de **NANOS2** é frequentemente avaliada como um marcador de especificação de linhagem em modelos de desenvolvimento e de células-tronco. Essas características fazem de **NANOS2** um ponto útil para estudar regulons de RNA, redes gênicas do desenvolvimento e estados transcricionais dependentes do contexto.

Nanos2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NANOS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nanos2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NANOS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NANOS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nanos2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NANOS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nanos2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nanos2 em células tumorais com expressão de NANOS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.