Nanos1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404414-ACT

O NANOS1 humano codifica a Nanos1, uma proteína de ligação a RNA conservada ao longo da evolução, que regula a expressão gênica pós-transcricional em células germinativas ao modular a estabilidade e a tradução de mRNAs. O NANOS1 participa de programas de manutenção e diferenciação da linhagem germinativa por meio da repressão de transcritos específicos, sustentando decisões de destino celular, sobrevivência e controle do ciclo celular. A atividade desregulada de NANOS1 tem sido associada a espermatogênese prejudicada e a fenótipos de infertilidade masculina, e foi relatada expressão alterada em alguns contextos tumorais nos quais vias associadas à linhagem germinativa são ativadas ectopicamente. Essas propriedades tornam o NANOS1 um ponto útil para estudar redes de regulação por RNA, controle gênico no desenvolvimento e mecanismos que conectam fatores da linhagem germinativa à plasticidade celular.

Nanos1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NANOS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nanos1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NANOS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NANOS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nanos1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NANOS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nanos1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nanos1 em células tumorais com expressão de NANOS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.