NALP6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404548-ACT

NLRP6 (NALP6) é um receptor citosólico do tipo NOD (NOD-like) que atua como sensor de reconhecimento de padrões e como plataforma para a montagem do inflamassoma, conectando sinais microbianos e de perigo a programas transcricionais da imunidade inata. Ele modula a ativação da caspase-1, o processamento de citocinas da família IL-1 e a sinalização subsequente de NF-κB e MAPK, influenciando assim a integridade da barreira epitelial e a homeostase imunológica da mucosa. A atividade de NALP6 tem sido associada à regulação das interações hospedeiro–microbioma e das respostas inflamatórias em tecidos gastrointestinais, e sua desregulação é estudada no contexto de inflamação crônica e de microambientes imunológicos associados a tumores. Como resultado, NLRP6 é comumente investigado em vias que controlam a piroptose, a maturação de citocinas e a comunicação cruzada da imunidade inata com células epiteliais e estromais.

NALP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NLRP6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NALP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NLRP6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NLRP6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NALP6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NLRP6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NALP6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NALP6 em células tumorais com expressão de NLRP6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.