NAG CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412223-ACT

ヒトNBASはNAGタンパク質をコードしており、ゴルジ体から小胞体（ER）へのCOPI介在性逆行輸送を支えるNRZテザリング複合体の構成要素で、ERおよびゴルジ体の恒常性の維持に寄与します。小胞のテザリングや膜輸送における役割を通じて、NBASは分泌経路の機能と細胞のプロテオスタシスに影響を及ぼし、その下流でストレス応答や代謝にも作用します。NBASの遺伝学的障害は、発熱性疾患を契機としてしばしば再発する急性肝不全エピソードを含む多系統の表現型と関連づけられており、肝細胞のレジリエンスおよび全身的な恒常性制御における重要性を示しています。これらの特性により、NBASは初期分泌経路のダイナミクス、オルガネラ間コミュニケーション、ならびにストレス適応的な転写プログラムを研究するための有用な標的となります。

NAG CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NBASの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NAG CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NBAS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNBAS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NAGの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNBAS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNAG依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNBAS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNAG経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。