Plásmido CRISPR de Activación (h) NaBC1: sc-405950-ACT

BCAS1 (secuencia 1 amplificada en carcinoma de mama) codifica la proteína humana NaBC1, un factor citoplasmático y asociado a membrana enriquecido en la glía mielinizante y utilizado con frecuencia como marcador de la dinámica del linaje de los oligodendrocitos. La expresión de BCAS1 se vincula a programas que gobiernan la diferenciación glial, la remodelación de membranas y la organización del citoesqueleto, los cuales sustentan la formación y el mantenimiento de la mielina en el sistema nervioso central. Se han descrito niveles desregulados de BCAS1 en contextos oncológicos debido a la amplificación genómica y a un control transcripcional alterado, y en investigación neurológica, donde los cambios en las poblaciones BCAS1-positivas reflejan modificaciones en la mielinización y en la integridad de la sustancia blanca. Estas características convierten a BCAS1 en un nodo útil para estudiar la regulación transcripcional durante la maduración glial, las transiciones de estado del linaje y la remodelación de las células mielinizantes asociada a enfermedad.

NaBC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCAS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NaBC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCAS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCAS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NaBC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCAS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NaBC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NaBC1 en células tumorales con expresión de BCAS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.