MYT1L Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421811-ACT

O Myt1l do camundongo codifica o MYT1L, um fator de transcrição da linhagem neural com domínios C2HC de ligação ao DNA do tipo dedo de zinco, que ajuda a consolidar a identidade neuronal e a regular redes gênicas durante a neurogênese e a maturação. O MYT1L atua principalmente como um represssor transcricional em neurônios em diferenciação, moldando programas envolvidos na especificação de subtipos neuronais, no desenvolvimento sináptico e na manutenção de estados neuronais pós-mitóticos. Alterações na dosagem ou na função de MYT1L estão associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento, incluindo deficiência intelectual e características relacionadas ao transtorno do espectro autista, o que o torna um nodo valioso para estudar mecanismos de regulação gênica no sistema nervoso em desenvolvimento e no adulto. Em modelos celulares, o controle transcricional dependente de MYT1L interage com a regulação da cromatina e com vias responsivas à atividade neuronal que influenciam a formação de circuitos e a plasticidade.

MYT1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Myt1l sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYT1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Myt1l em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Myt1l, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYT1L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Myt1l nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYT1L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYT1L em células tumorais com expressão de Myt1l silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.