Myosin Va Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402108

Visão geral

MYO5A codifica a miosina Va, uma proteína motora baseada em actina que impulsiona o transporte de longa distância de organelos ligados à membrana e de complexos proteicos ao longo da rede de actina cortical. A miosina Va coopera com GTPases Rab e proteínas adaptadoras para regular o tráfego de vesículas, a reciclagem endocítica, a dinâmica de grânulos secretores e a entrega polarizada de cargas em neurónios, melanócitos e células imunitárias. Estes processos contribuem para a função sináptica, a distribuição de melanossomas e a polarização celular, ligando a atividade de MYO5A a fenótipos neurológicos e de pigmentação quando é perturbada. Em modelos de células humanas, alterações no transporte dependente de miosina Va podem influenciar a sinalização compartimentalizada e a organização do citoesqueleto relevantes para a disfunção celular associada a doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Myosin Va (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MYO5A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MYO5A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MYO5A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Myosin Va.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MYO5A para a investigação da sinalização de Myosin Va, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MYO5A críticos para a função Myosin Va
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MYO5A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Myosin Va Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Myosin Va Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MYO5A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Myosin Va Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Myosin Va (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MYO5A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MYO5A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.