Myosin IIIb CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-414483

概要

MYO3BはミオシンIIIbをコードしており、ミオシンIIIbはアクチン依存性のモータータンパク質として、ATP加水分解をFアクチンに沿った運動へと結び付け、細胞骨格のリモデリングに関与します。ミオシンIIIファミリーのメンバーは、膜突出のダイナミクスやアクチン束の組織化の制御に関与するとされ、これらは細胞極性、小胞輸送、シグナル依存的な細胞構築の変化において中心的なプロセスです。こうした役割を通じてMYO3Bは、細胞骨格の張力やメカノトランスダクションを制御する経路と接点を持つ、移動や接着といったアクチン駆動の細胞挙動を支えます。アクチン–ミオシンネットワークの制御異常は、上皮の完全性や神経感覚細胞の構造に関わる疾患と広く関連するため、MYO3Bは細胞骨格制御の機構研究に有用な標的となります。

Myosin IIIb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYO3B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYO3B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYO3Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin IIIbタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin IIIbシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYO3B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin IIIbの機能に不可欠なMYO3Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYO3Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin IIIb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyosin IIIb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYO3B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin IIIb HDRプラスミド（h）および Myosin IIIb HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYO3Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYO3B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。