myoglobin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421575-ACT

O gene Mb do camundongo codifica a mioglobina, uma proteína ligante de oxigênio contendo heme que atua como tampão e facilita a difusão intracelular de O₂ no músculo estriado, sustentando a fosforilação oxidativa durante variações de carga de trabalho. Ao modular a disponibilidade local de oxigênio e a química de óxido nítrico/redox, a mioglobina influencia a respiração mitocondrial, o manejo de espécies reativas de oxigênio e a adaptação metabólica à hipóxia e ao exercício. Alterações na abundância ou na função da mioglobina têm sido investigadas em contextos de lesão muscular, miopatias e estresse associado à isquemia, nos quais o transporte de oxigênio e o desempenho mitocondrial são fatores limitantes. Na pesquisa biomédica, Mb serve como um alvo acessível para estudar, in vivo e em miócitos cultivados, a bioenergética muscular, programas de detecção de oxigênio e vias de estresse oxidativo.

myoglobin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mb sem alterar a sequência de ADN subjacente.

myoglobin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mb em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mb, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de myoglobin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mb nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de myoglobin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via myoglobin em células tumorais com expressão de Mb silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.