MyoD Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400092-LAC

O MYOD1 humano codifica o MyoD, um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básica (bHLH) que atua como regulador mestre do comprometimento miogênico esquelético e da diferenciação. O MyoD liga-se a motivos E-box para ativar programas gênicos musculares e coopera com remodeladores de cromatina e fatores de linhagem para promover a saída do ciclo celular e a formação de miotubos, integrando sinais de redes de fatores regulatórios miogênicos e do controle epigenético da transcrição. A atividade de MYOD1 interage com vias que governam o desenvolvimento muscular, a regeneração e a plasticidade de linhagem, e sua desregulação tem sido implicada em estados de diferenciação alterados e em programas miogênicos associados a tumores em certos cânceres. Como um nó em circuitos transcricionais, o MYOD1 é amplamente utilizado para investigar redes de regulação gênica, alterações na acessibilidade da cromatina e fenótipos associados à miogênese em modelos celulares humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais MyoD (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MYOD1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MyoD (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MYOD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MyoD. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MYOD1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.