MyoD Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400092-ACT

MYOD1 codifica o fator de transcrição humano MyoD do tipo hélice–alça–hélice básico, que atua como regulador-mestre da miogênese esquelética. O MyoD liga-se a motivos E-box e coopera com membros da família MEF2 e com remodeladores de cromatina para ativar programas de linhagem muscular, coordenar a saída do ciclo celular e promover a diferenciação por meio do controle transcricional de genes miogênicos estruturais e metabólicos. Sua atividade se cruza com entradas de sinalização, incluindo as vias Wnt/β-catenina, Notch, TGF-β/SMAD e MAPK, que ajustam o comprometimento e a maturação de mioblastos. A expressão ou função desregulada de MYOD1 é usada como marcador de um estado miogênico alterado e tem sido estudada em contextos como regeneração prejudicada, biologia da perda muscular e programas transcricionais associados a MYOD1 em modelos de rabdomiossarcoma.

MyoD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYOD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MyoD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYOD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYOD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MyoD. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYOD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MyoD no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MyoD em células tumorais com expressão de MYOD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.