MYH9 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-421784-LAC

Myh9 codifica a miosina IIA não muscular (MYH9), uma proteína motora dependente de actina que gera força contrátil e sustenta a organização do citoesqueleto em células de camundongo. A MYH9 regula a dinâmica de adesão, a polaridade celular e a migração ao coordenar o remodelamento actomiosínico, a formação de fibras de estresse e a mecanotransdução, com efeitos a jusante em processos como a citocinese e a integridade da barreira epitelial. Por meio de interações com a sinalização RhoA/ROCK, componentes das adesões focais e a maquinaria de tráfego de membranas, a MYH9 ajuda a acoplar sinais mecânicos a alterações na forma celular e em programas de expressão gênica. A atividade alterada de MYH9 tem sido associada a defeitos na biologia hematopoética e renal e é amplamente estudada em contextos envolvendo trombocitopenia, disfunção glomerular e fenótipos de desenvolvimento associados ao citoesqueleto.

As Partículas de Ativação Lentivirais MYH9 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Myh9 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MYH9 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Myh9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MYH9. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Myh9 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.