MYH7B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400621-ACT

MYH7B codifica um membro da família das cadeias pesadas de miosina sarcomérica, com funções na atividade motora baseada em actina e na organização da maquinaria contrátil em linhagens de músculo estriado. Como parte da geração de força dependente de miosina, o MYH7B está funcionalmente ligado à dinâmica do citoesqueleto, à transdução mecanoquímica dependente de ATP e a vias que mantêm a integridade das miofibrilas e a diferenciação de células musculares. A desregulação de programas gênicos de cadeias pesadas de miosina é comumente estudada no contexto do remodelamento de cardiomiócitos e do músculo esquelético, em que alterações na expressão de genes contráteis contribuem para fenótipos patológicos. Assim, o MYH7B serve como um alvo útil para investigar o controle transcricional de componentes do sarcômero, redes gênicas específicas do músculo e processos de remodelamento responsivos ao estresse em modelos de células humanas.

MYH7B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH7B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH7B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH7B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH7B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH7B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH7B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH7B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH7B em células tumorais com expressão de MYH7B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.