MYH7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400383-ACT

MYH7 codifica a cadeia pesada de β-miosina, uma proteína motora sarcomérica central que forma filamentos espessos no músculo estriado e converte a hidrólise de ATP em força mecânica. Sua interação regulada com a actina e com as cadeias leves de miosina sustenta a contratilidade, a montagem do sarcômero e programas de mecanotransdução que acoplam a carga de trabalho à adaptação transcricional e metabólica. A expressão de MYH7 e o equilíbrio entre isoformas estão intimamente ligados à fisiologia do coração e do músculo esquelético de contração lenta, integrando-se a vias de manuseio de cálcio, sinalização hipertrófica e remodelamento do citoesqueleto. A variação genética ou a desregulação de MYH7 está fortemente associada a cardiomiopatias hereditárias e a fenótipos de disfunção contrátil amplamente modelados em sistemas celulares humanos.

MYH7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH7 em células tumorais com expressão de MYH7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.