MYH4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400467-ACT

MYH4 codifica a cadeia pesada de miosina 4, um motor contrátil do músculo esquelético de contração rápida que atua em parceria com a actina para gerar força por meio do ciclo de pontes cruzadas dependente de ATP. Como componente central dos filamentos espessos sarcoméricos, MYH4 contribui para a montagem de miofibrilas, a especificação do tipo de fibra e programas de desempenho muscular regulados pelo manuseio de cálcio e por redes de sinalização metabólica. Embora MYH4 seja mais bem caracterizado na fisiologia do músculo esquelético de contração rápida, a expressão alterada de isoformas de miosina e a remodelação do sarcômero são características recorrentes em estados de doença neuromuscular e miopática, o que sustenta seu uso como marcador e como nó mecanístico em estudos de biologia muscular. A modulação da expressão de MYH4 oferece uma via viável para investigar as vias que governam a contratilidade, a adaptação muscular e as respostas ao estresse em modelos celulares humanos.

MYH4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH4 em células tumorais com expressão de MYH4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.