Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MYH10 Double Nickaseプラスミド (m): sc-429543-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MYH10 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MYH10ダブルニカースプラスミド（m）およびMYH10ダブルニカースプラスミド（m2）は、Myh10を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MYH10 抗体 (A-3): sc-376942
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MYH10 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-429543-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MYH10 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-429543-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Myh10は、非筋ミオシン重鎖IIB（MYH10）をコードしており、細胞質分裂、細胞移動、ならびに組織構築の維持に必要な収縮力を生み出す主要なアクチン依存性モーターである。MYH10によって駆動されるアクトミオシン動態は、フォーカルアドヒージョンのターンオーバーやRhoA/ROCK依存的な細胞骨格リモデリングを介して細胞接着と極性を制御し、機械的張力を形態形成を規定するシグナル出力へと結び付ける。マウス系では、MYH10活性は発生プログラムや神経・心血管組織の組織化と密接に関連しており、非筋ミオシンII機能の破綻は、細胞分裂不全、運動性の変化、疾患関連表現型に関わる異常な細胞外マトリックス相互作用と関連付けられている。これらの性質により、Myh10はメカノトランスダクション、細胞骨格の組織化、ならびに力依存的な遺伝子発現制御を解析するうえで有用な結節点となる。
MYH10 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Myh10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Myh10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Myh10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Myh10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。