MYH10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401835-ACT

MYH10 は、アクチンに基づくモータータンパク質である非筋ミオシン IIB をコードしており、収縮力の発生を駆動するとともに、細胞骨格の組織化、細胞接着、方向性移動を制御します。アクトミオシン・ネットワークにおける機能を通じて、MYH10 は細胞質分裂、組織形態形成、メカノトランスダクションを支え、Rho GTPase シグナル伝達、フォーカルアドヒージョンのダイナミクス、皮質張力を制御する経路と連関します。MYH10 の発現変化やミオシン II 機能の変調は、細胞運動性および発生過程の異常な制御と関連づけられており、上皮リモデリング、神経発生、線維化に伴う細胞表現型の研究において重要です。細胞骨格の中核的構成要素として、MYH10 は細胞形状変化、バリア機能、力依存的シグナル伝達を検証するモデルで頻繁に研究されています。

MYH10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYH10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYH10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYH10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYH10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYH10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYH10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYH10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYH10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYH10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。