MYEOV2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409378-ACT

COPS9 (auch als MYEOV2 bekannt) kodiert eine Komponente, die mit dem COP9-Signalosom assoziiert ist – einem konservierten Regulator von Cullin-RING-Ubiquitin-Ligasen, der den Proteinumsatz über Deneddylierung sowie Ubiquitin-Proteasom-Wege feinjustiert. Durch die Kontrolle der ubiquitinabhängigen Degradation beeinflussen COPS9/MYEOV2-verknüpfte Prozesse die Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten und Signaltransduktionsprogramme, darunter MAPK- und NF-κB-assoziierte Netzwerke. Eine Fehlregulation der COP9-Signalosom-Aktivität wurde mit gestörter Proteostase und transkriptioneller Umprogrammierung in mehreren Krebs-Kontexten in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von COPS9/MYEOV2 hinsichtlich Proliferations- und Stressadaptations-Phänotypen unterstützt. Diese Funktionen machen es zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zur ubiquitinvermittelten Regulation und zum Pathway-Crosstalk in menschlichen Zellen.

MYEOV2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen COPS9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MYEOV2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des COPS9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der COPS9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MYEOV2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native COPS9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MYEOV2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MYEOV2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem COPS9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.