MYEOV2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409378-ACT

COPS9 (também conhecido como MYEOV2) codifica um componente associado ao signalossoma COP9, um regulador conservado das ligases de ubiquitina do tipo cullin-RING, que ajusta a renovação de proteínas por meio da desnedilação e das vias ubiquitina–proteassoma. Ao controlar a degradação dependente de ubiquitina, processos ligados a COPS9/MYEOV2 influenciam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e programas de transdução de sinal, incluindo redes associadas a MAPK e NF-κB. A desregulação da atividade do signalossoma COP9 tem sido relacionada a proteostase aberrante e à reprogramação transcricional observadas em múltiplos contextos de câncer, sustentando a investigação de COPS9/MYEOV2 em fenótipos de proliferação e adaptação ao estresse. Essas funções o tornam um alvo relevante para estudos mecanísticos da regulação mediada por ubiquitina e do crosstalk entre vias em células humanas.

MYEOV2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COPS9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYEOV2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COPS9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COPS9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYEOV2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COPS9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYEOV2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYEOV2 em células tumorais com expressão de COPS9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.