MYBPC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407591-ACT

MYBPC2 は、ミオシン結合タンパク質C（速筋型）をコードしており、横紋筋において太いフィラメントに結合するサルコメアタンパク質として、アクトミオシンのクロスブリッジサイクルを調節し、ミオシンフィラメントの構造的配置を安定化します。ミオシン重鎖およびチチンとの相互作用を介して、MYBPC2 は収縮能とサルコメア形成に寄与し、力発生のカルシウム感受性調節にも影響を与えます。MYBPC2 を含むサルコメア構造遺伝子の発現変化や制御異常は、筋原線維リモデリングや筋機能表現型に関する研究において重要です。ヒトの生物医学研究では、MYBPC2 は筋発生、機械的ストレス応答、ならびにサルコメアの完全性を制御する経路の文脈で頻繁に解析されています。

MYBPC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYBPC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYBPC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYBPC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYBPC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYBPC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYBPC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYBPC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYBPC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYBPC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。