MYBBP1A Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422090-ACT

Mybbp1a codifica a MYBBP1A de camundongo (proteína 1A ligante de MYB), um corregrador transcricional predominantemente nucleolar que integra a sinalização associada à cromatina com a biogênese de ribossomos e o controle do ciclo celular. Foi relatado que a MYBBP1A modula programas transcricionais ligados à atividade da RNA polimerase I, às respostas ao estresse nucleolar e à regulação metabólica, influenciando o crescimento e a proliferação celulares. Por meio de interações com fatores de transcrição e complexos modificadores de cromatina, a MYBBP1A pode impactar vias que governam a diferenciação e a expressão gênica adaptativa ao estresse. A alteração da expressão ou da função de MYBBP1A está associada a fenótipos de proliferação desregulada e de manutenção do genoma, relevantes para a biologia do câncer e outros contextos em que a função nucleolar e a homeostase transcricional estão perturbadas.

MYBBP1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mybbp1a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYBBP1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mybbp1a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mybbp1a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYBBP1A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mybbp1a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYBBP1A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYBBP1A em células tumorais com expressão de Mybbp1a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.