Mx2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400697-ACT

O gene humano **MX2** codifica a proteína de resistência a mixovírus 2 (Mx2), uma GTPase semelhante à dinamina, estimulada por interferon, que atua como um fator intrínseco de restrição antiviral. A Mx2 é induzida pela sinalização de interferons do tipo I e do tipo III e funciona em vias da imunidade inata para limitar a replicação de diversos vírus por meio de interações com componentes virais e com a maquinaria celular de tráfego intracelular. Ao modular programas transcricionais induzidos por interferon e redes de efetores antivirais, o **MX2** ajuda a moldar as respostas de defesa do hospedeiro e inflamatórias. Assinaturas de interferon desreguladas e expressão alterada de **MX2** têm sido associadas a estados de infecção crônica e a patologia mediada pelo sistema imune, tornando **MX2** um marcador útil e um ponto mecanístico central para o estudo da biologia do interferon.

Mx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mx2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mx2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mx2 em células tumorais com expressão de MX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.