Muskelin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409182-ACT

MKLN1 umano codifica muskelin, una proteina scaffold multidominio implicata nell’organizzazione dell’architettura del citoscheletro e nel coordinamento del traffico intracellulare. Muskelin è stata associata a processi dipendenti dall’actina, al trasporto vescicolare e al turnover regolato di complessi proteici, contribuendo al controllo spaziale della segnalazione e della dinamica dei recettori. Attraverso questi ruoli, MKLN1 può influenzare vie che regolano adesione e migrazione cellulare, oltre alla proteostasi, spesso rimodellate nella biologia dei tumori e in contesti neurobiologici. L’espressione deregolata o le perturbazioni delle reti associate a muskelin sono state studiate per i loro effetti su morfologia cellulare, risposte allo stress e omeostasi della segnalazione in modelli rilevanti per la malattia.

Muskelin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MKLN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Muskelin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MKLN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MKLN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Muskelin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MKLN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Muskelin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Muskelin nelle cellule tumorali con espressione di MKLN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.