Munc13-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423611
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Munc13-2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Munc13-2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Munc13-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423611 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Unc13b codifica a Munc13-2, um fator de priming da zona ativa pré-sináptica necessário para a maturação das vesículas sinápticas até um estado prontamente liberável e para a liberação eficiente de neurotransmissores evocada por Ca²⁺. A Munc13-2 coopera com reguladores de SNARE e com a rede RIM/Rab3 para coordenar o ancoramento (docking), o priming e a plasticidade de curto prazo, moldando assim a força sináptica e a atividade dos circuitos. Por meio de seus domínios C1 e C2, a Munc13-2 integra a sinalização dependente de diacilglicerol e de Ca²⁺ para ajustar a probabilidade de liberação e a dinâmica dos pools de vesículas. A desregulação do priming vesicular e da transmissão sináptica é amplamente relevante para fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, o que motiva estudos mecanísticos de Unc13b na sinalização neuronal e na disfunção de redes.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Munc13-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Unc13b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Unc13b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Unc13b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Munc13-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Unc13b para a investigação da sinalização de Munc13-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Unc13b críticos para a função Munc13-2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Unc13b para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Munc13-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Munc13-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Unc13b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Munc13-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Munc13-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Unc13b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Unc13b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.