mucolipin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430117
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- mucolipin 1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico mucolipin 1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
mucolipin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-430117 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Mcoln1 codifica a mucolipina 1 (TRPML1), um canal catiônico permeável a Ca2+ localizado em endolisossomos que regula a biogênese dos lisossomos, o tráfego de membranas e o fluxo autofágico. A liberação de Ca2+ mediada por TRPML1 dá suporte à fusão entre lisossomos e autofagossomos, ao processamento de cargas endocíticas e a vias de sinalização ligadas à detecção de nutrientes e às respostas celulares ao estresse. A disfunção da mucolipina 1 desequilibra a homeostase lisossomal, promovendo o acúmulo de substratos não degradados e alterações no controle de qualidade mitocondrial. Assim, Mcoln1 é amplamente estudado em modelos de doenças de armazenamento lisossomal e de defeitos, associados à neurodegeneração, na função endolisossomal.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO mucolipin 1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mcoln1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mcoln1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mcoln1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína mucolipin 1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mcoln1 para a investigação da sinalização de mucolipin 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mcoln1 críticos para a função mucolipin 1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mcoln1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo mucolipin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo mucolipin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mcoln1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo mucolipin 1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR mucolipin 1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mcoln1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mcoln1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.