Mucin 12/MUC12 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400505-ACT

MUC12 codifica a mucina 12, uma mucina ancorada à membrana e intensamente O-glicosilada, que contribui para o glicocálice epitelial e sustenta a função de barreira nas superfícies mucosas. Ao moldar o microambiente pericelular, a MUC12 pode influenciar interações célula–célula e célula–matriz, a organização da membrana apical e as respostas a estímulos inflamatórios em epitélios gastrointestinais e outros. Alterações na expressão e na glicosilação de mucinas são frequentemente associadas à remodelação epitelial, à diferenciação desregulada e a mudanças em programas de adesão e sinalização. Assim, a MUC12 é estudada como um marcador e modulador dependente do contexto na inflamação mucosa e em cânceres epiteliais, incluindo investigações sobre como a biologia das mucinas afeta as interações tumor–microambiente.

Mucin 12/MUC12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MUC12 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mucin 12/MUC12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MUC12 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MUC12, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mucin 12/MUC12. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MUC12 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mucin 12/MUC12 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mucin 12/MUC12 em células tumorais com expressão de MUC12 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.