Mucin 1/MUC1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-416876-NIC

MUC1 codifica a mucina 1, uma mucina transmembrana do tipo I fortemente O-glicosilada, expressa na superfície apical de muitos tecidos epiteliais, onde contribui para a função de barreira, a hidratação e a proteção contra o estresse ambiental. Por meio de sua cauda citoplasmática, a MUC1 participa de redes de sinalização que regulam a polaridade celular, a adesão e respostas transcricionais, interagindo com vias como a sinalização por receptores tirosina-quinase e processos a jusante associados a MAPK/PI3K. Alterações na expressão, na localização ou nos glicoformes de MUC1 são frequentemente associadas a desorganização epitelial e a interações imunes desreguladas em contextos inflamatórios e neoplásicos. Como resultado, a MUC1 é amplamente estudada como moduladora da homeostase epitelial, da biologia de células tumorais e da sinalização microambiental dependente de mucinas.

Mucin 1/MUC1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MUC1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MUC1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MUC1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MUC1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.