mTOR CRISPR Activationプラスミド (m): sc-425273-ACT

Mtor はセリン／スレオニンキナーゼである mTOR をコードしており、栄養、エネルギー、増殖因子シグナルを統合して細胞の成長・代謝・生存を調節する中枢的な因子です。mTOR は mTORC1 および mTORC2 複合体として機能し、S6K や 4E-BP1 などのエフェクターを介して、タンパク質合成、オートファジー、脂質生合成、細胞骨格の構築、ならびにインスリン／PI3K–AKT シグナル伝達を制御します。マウス系では、mTOR 経路活性の変化が、増殖制御の破綻や代謝リモデリングをモデル化するために広く用いられており、がん生物学、神経科学、免疫細胞機能の研究とも関連します。mTOR は環境由来の手掛かりを同化（アナボリック）・異化（カタボリック）プログラムへ結び付けるため、Mtor 発現を攪乱することは、ストレス応答、ミトコンドリア恒常性、細胞運命決定を解析するための一般的な戦略となっています。

mTOR CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mtorの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mTOR CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mtor 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMtor転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mTORの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMtor遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmTOR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMtor発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmTOR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。