MTMR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429507-ACT

Mtmr2 codifica a MTMR2, uma fosfatase 3 de fosfoinositídeos que desfosforila PI3P e PI(3,5)P2 para regular o tráfego endossomal, o remodelamento de membranas e a sinalização dependente de fosfoinositídeos. Em células de camundongo, a MTMR2 contribui para o controle da dinâmica vesicular e da organização do citoesqueleto, influenciando a renovação de receptores e o transporte intracelular. Alterações na atividade de MTMR2 perturbam a homeostase endolisossomal e programas celulares relacionados à mielina, conectando vias associadas a MTMR2 a fenótipos de neuropatia periférica. Essas funções tornam Mtmr2 um alvo útil para estudar o metabolismo de fosfoinositídeos e seu impacto nas redes de tráfego de membranas em sistemas neurais e não neurais.

MTMR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mtmr2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MTMR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mtmr2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mtmr2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MTMR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mtmr2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MTMR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MTMR2 em células tumorais com expressão de Mtmr2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.