MTA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402739-NIC

MTA3 (metastasis associated 1 family member 3) umano è un regolatore associato alla cromatina che funziona come componente del complesso NuRD (nucleosome remodeling and deacetylase), coordinando il rimodellamento dipendente da ATP con la deacetilazione degli istoni per modulare i programmi trascrizionali. Modellando l’accessibilità di enhancer e promotori, MTA3 influenza processi quali il mantenimento dell’identità cellulare, la proliferazione e la differenziazione specifica di linea, in particolare in contesti epiteliali. Reti di repressione/attivazione dipendenti da MTA3 e deregolate sono state collegate ad alterazioni della segnalazione della transizione epitelio-mesenchimale (EMT) e a cambiamenti nelle firme di espressione genica osservate in diversi modelli rilevanti per la malattia. In quanto fattore epigenetico nucleare, MTA3 viene spesso studiato per collegare il rimodellamento della cromatina agli output di via, come la trascrizione responsiva agli ormoni, la regolazione del ciclo cellulare e i programmi di risposta allo stress.

MTA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MTA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MTA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MTA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MTA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.