MTA3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402739-ACT

La MTA3 umana (metastasis-associated protein 3) è un componente centrale del complesso NuRD di rimodellamento della cromatina e deacetilazione degli istoni, coordinando il posizionamento dei nucleosomi e la repressione trascrizionale in programmi genici legati allo sviluppo e alla definizione delle linee cellulari. Attraverso l’interazione con le HDAC e altre subunità di NuRD, MTA3 modula la differenziazione epiteliale, la trascrizione responsiva agli ormoni e gli stati trascrizionali associati al ciclo cellulare tramite regolazione epigenetica. Un’espressione deregolata di MTA3 o un’alterata attività di NuRD sono state associate a differenziazione anomala, pattern di espressione genica correlati alla transizione epitelio-mesenchimale (EMT) e alla biologia tumorale in molteplici contesti tissutali. In quanto regolatore della cromatina, MTA3 è spesso studiata per i suoi ruoli nella plasticità trascrizionale, nell’accessibilità della cromatina e nel controllo a livello di rete dell’espressione genica.

MTA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MTA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MTA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MTA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MTA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MTA3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MTA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MTA3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MTA3 nelle cellule tumorali con espressione di MTA3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.