Msx-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403657-ACT

O MSX2 humano codifica o fator de transcrição homeobox Msx-2, um regulador nuclear que integra sinais do desenvolvimento para controlar decisões de destino celular, bem como programas de proliferação e diferenciação. O Msx-2 atua a jusante de BMP/TGF-β e interage com as vias Wnt e FGF para coordenar interações epitélio–mesênquima, o padrão craniofacial e dos membros, a diferenciação osteogênica e o desenvolvimento dentário. A atividade desregulada de MSX2 tem sido associada à formação óssea aberrante e a fenótipos craniofaciais, e há relatos de expressão alterada em contextos que envolvem remodelamento tecidual anormal e comprometimento de linhagens. Como repressor/ativador transcricional dependendo de cofatores, o Msx-2 é frequentemente estudado pelo seu impacto no estado da cromatina e em redes gênicas a jusante que governam a morfogênese.

Msx-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MSX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Msx-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MSX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MSX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Msx-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MSX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Msx-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Msx-2 em células tumorais com expressão de MSX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.