mSin3B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401638-ACT

ヒトSIN3BはmSin3Bをコードしており、mSin3BはSIN3転写コリプレッサー複合体の中核構成要素として、ヒストン脱アセチル化酵素（HDAC1/2を含む）や関連するクロマチン制御因子を足場として集積させ、エピジェネティック状態の形成に寄与する。mSin3Bは、配列特異的転写因子およびクロマチン結合タンパク質との相互作用を介して、細胞周期制御、分化、細胞老化、ストレス応答性転写を司る遺伝子プログラムを調節する。SIN3B依存的なクロマチン再構築は転写抑制と系譜決定経路に影響を与え、その機能はがんにおける転写制御の破綻や細胞増殖状態の変化に関わる機構と結び付けられている。Sin3/HDAC複合体は複数のシグナル入力を統合するため、エピジェネティックな抑制や転写ネットワークの安定性が乱れた状況の解析において、SIN3Bはしばしば研究対象となる。

mSin3B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SIN3Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mSin3B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SIN3B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSIN3B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mSin3Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSIN3B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmSin3B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSIN3B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmSin3B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。