MRS2L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410061

概要

ヒトMRS2は、ミトコンドリア内膜に存在するMg2+チャネルであるMRS2Lをコードしており、マトリックス内のマグネシウム恒常性の維持、酸化的リン酸化の支持、ならびに生体エネルギー学的ストレスの緩衝に必須です。MRS2Lは、ATPの取り扱い（代謝）やミトコンドリア酵素機能などのMg2+依存的な活性を調節することで、ミトコンドリア膜電位、カルシウム連関、活性酸素種（ROS）バランスに影響を与えます。ミトコンドリアのイオン輸送やMg2+利用可能性の乱れは、ミトコンドリア代謝およびストレス応答の異常に関与するとされ、神経変性、心代謝性疾患、ならびにがん細胞の適応に関する研究でしばしば検討されています。そのためMRS2Lは、ミトコンドリアシグナル伝達、代謝可塑性、オルガネラ品質管理経路を解析するうえで有用な結節点となります。

MRS2L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMRS2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MRS2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MRS2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MRS2Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MRS2Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MRS2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MRS2Lの機能に不可欠なMRS2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MRS2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MRS2L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMRS2L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MRS2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MRS2L HDRプラスミド（h）および MRS2L HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMRS2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMRS2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。