MRP6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402219

Panoramica

ABCC6 codifica il trasportatore della famiglia ATP-binding cassette MRP6, una pompa di efflusso della membrana plasmatica espressa prevalentemente in fegato e rene che regola l’omeostasi extracellulare di nucleotidi e metaboliti. L’attività di MRP6 influenza la segnalazione purinergica e l’equilibrio del pirofosfato inorganico, collegando la funzione del trasportatore a vie che controllano la mineralizzazione ectopica e l’integrità del tessuto connettivo. Varianti loss-of-function in ABCC6 sono associate allo pseudoxantoma elastico e a fenotipi correlati di calcificazione, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio del rimodellamento della matrice extracellulare, della calcificazione vascolare e della biologia dei trasportatori specifica di tessuto. I modelli ABCC6/MRP6 supportano inoltre l’indagine sul traffico dei trasportatori ABC, sul trasporto di substrati ATP-dipendente e sulle vie compensatorie tra le proteine di resistenza multifarmaco.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ABCC6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ABCC6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ABCC6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MRP6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ABCC6 per lo studio della segnalazione di MRP6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ABCC6 critici per la funzione di MRP6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ABCC6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MRP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MRP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ABCC6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MRP6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MRP6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ABCC6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ABCC6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.