MRP3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401508-LAC

ABCC3 codifica o transportador da família ATP-binding cassette MRP3 (ABCC3), uma bomba de efluxo basolateral que exporta um amplo espectro de ânions orgânicos, incluindo conjugados de glucuronídeo, sulfato e glutationa. O MRP3 dá suporte à desintoxicação de fase II ao acoplar a formação de conjugados à exportação celular, influenciando o processamento hepático e intestinal de xenobióticos, a homeostase dos ácidos biliares e as respostas ao estresse inflamatório. Sua atividade se cruza com a disposição de fármacos e com funções de barreira reguladas por transportadores, tornando o ABCC3 um nó relevante em estudos de vias orientados à farmacologia e em modelos de disfunção hepatobiliar, sinalização associada à colestase e fenótipos de quimiorresistência mediados por transportadores. A expressão desregulada de ABCC3 foi relatada em diversos contextos de doença, nos quais a alteração do fluxo de metabólitos conjugados e do equilíbrio redox contribui para a adaptação celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais MRP3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ABCC3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MRP3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ABCC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MRP3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ABCC3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.