MRP2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400601-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MRP2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MRP2 Double Nickase Plasmid (h) e il MRP2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABCC2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MRP2 Antibody (G-1): sc-518048
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MRP2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400601-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRP2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400601-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCC2 codifica per il trasportatore umano della famiglia ATP-binding cassette MRP2 (ABCC2), una pompa di efflusso apicale che esporta coniugati del glutatione, del glucuronide e del solfato, nonché una gamma di xenobiotici, attraverso epiteli polarizzati. MRP2 supporta la detossificazione e la formazione della bile accoppiando l’idrolisi dell’ATP al trasporto canalicolare negli epatociti e contribuisce alla funzione di barriera in intestino e rene. Regolando l’esposizione intracellulare a metaboliti e farmaci, l’attività di ABCC2 influenza la farmacocinetica e le risposte cellulari allo stress, intersecandosi con vie che controllano lo stress ossidativo, il metabolismo di coniugazione e la segnalazione infiammatoria. Un’alterazione genetica o funzionale di ABCC2 è associata a fenotipi di iperbilirubinemia coniugata come la sindrome di Dubin–Johnson ed è ampiamente studiata per il suo ruolo nella disposizione dei farmaci e nei meccanismi di resistenza multidrug.
MRP2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABCC2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABCC2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABCC2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABCC2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.