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MRG1双切口酶质粒(m) | sc-421714-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRG1双切口酶质粒(m2) | sc-421714-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Cited2 编码转录共调控因子 MRG1。MRG1 是一种可与 CBP/p300 相互作用的蛋白,在发育过程与细胞适应过程中,通过调节情境依赖性的基因表达程序发挥作用。MRG1 通过拮抗 HIF-1 依赖的转录,并通过影响共激活因子的可用性来微调与 MAPK 相关以及对 TGF-β 有反应的转录输出,从而整合缺氧与生长因子通路的信号。借助这些机制,Cited2 影响细胞命运决定、增殖与应激反应;在模型系统中,其失调与先天性心血管和造血表型相关,也与炎症性及致癌性转录状态的改变有关。
MRG1 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Cited2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Cited2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Cited2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Cited2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。